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小鼠ELISA試劑盒標本的採集及儲存

釋出時間☁│↟↟·:2022-03-20   點選次數☁│↟↟·:194次
       小鼠ELISA試劑盒標本的採集及儲存☁│↟↟·:
  1.血清☁│↟↟·:室溫血液自然凝固10-20分鐘後↟₪▩☁╃,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•│╃╃。仔細收集上清•│╃╃。儲存過程中如有沉澱形成↟₪▩☁╃,應再次離心•│╃╃。
  2.血漿☁│↟↟·:應根據標本的要求選擇EDTA☁₪✘、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑↟₪▩☁╃,混合10-20分鐘後↟₪▩☁╃,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•│╃╃。仔細收集上清•│╃╃。儲存過程中如有沉澱形成↟₪▩☁╃,應再次離心•│╃╃。
  3.尿液☁│↟↟·:用無菌管收集•│╃╃。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•│╃╃。仔細收集上清•│╃╃。儲存過程中如有沉澱形成↟₪▩☁╃,應再次離心•│╃╃。胸腹水☁₪✘、腦脊液參照此實行•│╃╃。
  4.細胞培養上清☁│↟↟·:檢測分泌性的成份時↟₪▩☁╃,用無菌管收集•│╃╃。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•│╃╃。仔細收集上清•│╃╃。檢測細胞內的成份時↟₪▩☁╃,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液↟₪▩☁╃,細胞濃度達到100萬/ml左右•│╃╃。透過反覆凍融↟₪▩☁╃,以使細胞破壞並放出細胞內成份•│╃╃。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•│╃╃。仔細收集上清•│╃╃。儲存過程中如有沉澱形成↟₪▩☁╃,應再次離心•│╃╃。
  5.組織標本☁│↟↟·:切割標本後↟₪▩☁╃,稱取重量•│╃╃。加入一定量的PBS↟₪▩☁╃,PH7.4•│╃╃。用液氮迅速冷凍儲存備用•│╃╃。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度•│╃╃。加入一定量的PBS(PH7.4)↟₪▩☁╃,用手工或勻漿器將標本勻漿充分•│╃╃。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)•│╃╃。仔細收集上清•│╃╃。分裝後一份待檢測↟₪▩☁╃,其餘冷凍備用•│╃╃。
  小鼠ELISA試劑盒操作步驟☁│↟↟·:
  1.從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條↟₪▩☁╃,剩餘板條用自封袋密封放回4℃•│╃╃。
  2.設定標準品孔和樣本孔↟₪▩☁╃,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.樣本孔先加待測樣本10μL↟₪▩☁╃,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加•│╃╃。
  4.除空白孔外↟₪▩☁╃,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL↟₪▩☁╃,用封板膜封住反應孔↟₪▩☁╃,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min•│╃╃。
  5.棄去液體↟₪▩☁╃,吸水紙上拍幹↟₪▩☁╃,每孔加滿洗滌液↟₪▩☁╃,靜置1min↟₪▩☁╃,甩去洗滌液↟₪▩☁╃,吸水紙上拍幹↟₪▩☁╃,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)•│╃╃。
  6.每孔加入底物A☁₪✘、B各50μL↟₪▩☁╃,37℃避光孵育15min•│╃╃。
  7.每孔加入終止液50μL↟₪▩☁╃,15min內↟₪▩☁╃,在450nm波長處測定各孔的OD值•│╃╃。
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