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人端粒酶(TE)ELISA試劑盒操作步驟

釋出時間₪│◕·:2022-11-12   點選次數₪│◕·:22次
   人端粒酶(TE)ELISA試劑盒採用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)╃◕☁。往預先包被人端粒酶(TE)捕獲抗體的包被微孔中│◕↟,依次加入標本│╃、標準品│╃、HRP標記的檢測抗體│◕↟,經過溫育並洗滌╃◕☁。用底物TMB顯色│◕↟,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色│◕↟,並在酸的作用下轉化成最終的黃色╃◕☁。顏色的深淺和樣品中的人端粒酶(TE)呈正相關╃◕☁。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)│◕↟,計算樣品濃度╃◕☁。
  
  操作步驟₪│◕·:
  1│╃、從室溫平衡60min後的鋁箔袋中取出所需板條│◕↟,剩餘板條用自封袋密封放回4℃╃◕☁。
  2│╃、設定標準品孔和樣本孔│◕↟,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3│╃、待測樣本孔先加待測樣本10μL│◕↟,再加樣本稀釋液40μL;
  4│╃、隨後標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL│◕↟,用封板膜封住反應孔│◕↟,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min╃◕☁。
  5│╃、棄去液體│◕↟,吸水紙上拍幹│◕↟,每孔加滿洗滌液│◕↟,靜置1min│◕↟,甩去洗滌液│◕↟,吸水紙上拍幹│◕↟,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)╃◕☁。
  6│╃、每孔加入底物A│╃、B各50μL│◕↟,37℃避光孵育15min╃◕☁。
  7│╃、每孔加入終止液50μL│◕↟,15min內│◕↟,在450nm波長處測定各孔的OD值╃◕☁。
  
  操作注意事項₪│◕·:
  1│╃、試劑盒儲存在2-8℃│◕↟,使用前室溫平衡60分鐘╃◕☁。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶│◕↟,這屬於正常現象│◕↟,水浴加熱使結晶溶解後再使用╃◕☁。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘╃◕☁。
  2│╃、實驗中不用的板條應立即放回自封袋中│◕↟,密封(低溫乾燥)儲存╃◕☁。
  3│╃、預處理後的樣本無需稀釋│◕↟,直接取10μL加樣即可╃◕☁。
  4│╃、嚴格按照說明書中標明的時間│╃、加液量及順序進行溫育操作╃◕☁。
  5│╃、所有液體組分使用前充分搖勻╃◕☁。
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