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大鼠骨保護素(OPG)ELISA試劑盒實驗原理及操作步驟

釋出時間│·:2022-10-20   點選次數│·:61次
   大鼠骨保護素(OPG)ELISA試劑盒主要是用於測定大鼠血清▩▩₪··、血漿及相關液體樣本中骨保護素(OPG)含量✘₪,應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠骨保護素(OPG)水平↟╃╃☁✘。用純化的大鼠骨保護素(OPG)抗體包被微孔板✘₪,製成固相抗體✘₪,往包被單抗的微孔中依次加入骨保護素(OPG)再與HRP標記的骨保護素(OPG)抗體結合✘₪,形成抗體抗原酶標抗體複合物✘₪,經過*洗滌後加底物TMB顯色↟╃╃☁✘。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色✘₪,並在酸的作用下轉化成Z終的黃色↟╃╃☁✘。顏色的深淺和樣品中的骨保護素(OPG)呈正相關↟╃╃☁✘。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)✘₪,透過標準曲線計算樣品中大鼠骨保護素(OPG)濃度↟╃╃☁✘。
  
  操作步驟│·:
  1▩▩₪··、從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條✘₪,剩餘板條用自封袋密封放回4℃↟╃╃☁✘。
  2▩▩₪··、設定標準品孔和樣本孔✘₪,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;樣本孔加待測樣本50μL↟╃╃☁✘。
  3▩▩₪··、樣本孔先加待測樣本10μL✘₪,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加↟╃╃☁✘。
  4▩▩₪··、除空白孔外✘₪,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL✘₪,用封板膜封住反應孔✘₪,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min↟╃╃☁✘。
  5▩▩₪··、棄去液體✘₪,吸水紙上拍幹✘₪,每孔加滿洗滌液✘₪,靜置1min✘₪,甩去洗滌液✘₪,吸水紙上拍幹✘₪,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)↟╃╃☁✘。
  6▩▩₪··、每孔加入底物A▩▩₪··、B各50μL✘₪,37℃避光孵育15min↟╃╃☁✘。
  7▩▩₪··、每孔加入終止液50μL✘₪,15min內✘₪,在450nm波長處測定各孔的OD值↟╃╃☁✘。
  8▩▩₪··、結果判斷繪製標準曲線│·:在Excel工作表中✘₪,以標準品濃度作橫座標✘₪,對應OD值作縱座標✘₪,繪製出標準品線性迴歸曲線✘₪,按曲線方程計算各樣本濃度值↟╃╃☁✘。
  
  實驗原理│·:
  大鼠骨保護素(OPG)ELISA試劑盒用純化的抗體包被微孔板✘₪,製成固相載體✘₪,往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品▩▩₪··、生物素化的抗C3抗體▩▩₪··、HRP標記的親和素✘₪,經過*洗滌後用底物TMB顯色↟╃╃☁✘。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色✘₪,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色↟╃╃☁✘。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關↟╃╃☁✘。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)✘₪,計算樣品濃度↟╃╃☁✘。
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