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人乙醛脫氫酶2(ALDH2) 酶聯免疫吸附測定試劑盒簡介

釋出時間•₪✘✘:2022-08-24   點選次數•₪✘✘:242次

 

 

 

乙醛脫氫酶2(ALDH2)

酶聯免疫吸附測定試劑盒

本試劑盒僅供體外研究使用✘✘,不用於臨床診斷

 

使

 


 

 

 

 

 

 

 

本試劑盒用於體外定量檢測血清▩·•│、血漿▩·•│、組織勻漿及相關液體樣本人乙醛脫氫酶2ALDH2活性│☁✘☁。

有效期•₪✘✘:6個月

儲存條件•₪✘✘:2-8

 


試劑盒組成•₪✘✘:

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12×8

12×4

標準品

0.3mL*6

0.3mL*6

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1


•₪✘✘:

1. 96T/48T)開啟包裝後請及時檢查所有物品是否齊全│☁✘☁。

2. 標準品濃度依次為•₪✘✘:80▩·•│、40▩·•│、20▩·•│、10▩·•│、5▩·•│、0  U/L

3. 經過大量正常標本檢驗✘✘,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍內✘✘,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可│☁✘☁。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時✘✘,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋後再進行實驗│☁✘☁。

檢測前準備工作•₪✘✘:

1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒✘✘,平衡至室溫│☁✘☁。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶✘✘,屬於正常現象;放置室溫✘✘,輕搖均勻✘✘,待結晶*溶解後再配置洗滌液│☁✘☁。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液✘✘,未用完的放回4

3. 2洗滌緩衝液的稀釋•₪✘✘:蒸餾水按1•₪✘✘:20稀釋✘✘,即120×洗滌緩衝液加19份蒸餾水│☁✘☁。│☁✘☁。


實驗原理•₪✘✘:

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)│☁✘☁。往預先包被人乙醛脫氫酶2ALDH2)捕獲抗體的包被微孔中✘✘,依次加入標本▩·•│、標準品▩·•│、HRP標記的檢測抗體✘✘,經過溫育並*洗滌│☁✘☁。用底物TMB顯色✘✘,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色✘✘,並在酸的作用下轉化成最終的黃色│☁✘☁。顏色的深淺和樣品中的人乙醛脫氫酶2ALDH2)呈正相關│☁✘☁。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)✘✘,計算樣品活性│☁✘☁。

實驗所需自備試驗器材•₪✘✘:

1. 酶標儀(450nm

2. 高精度加樣器及槍頭•₪✘✘:0.5-10uL▩·•│、2-20uL▩·•│、20-200uL▩·•│、200-1000uL

3. 37恆溫箱

4. 蒸餾水或去離子水


樣本處理及要求•₪✘✘:

1. 血清•₪✘✘:將收集於血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜✘✘,然後1000×g離心20 分鐘✘✘,取上清即可✘✘,或將上清置於-20℃或-80℃儲存✘✘,但應避免反覆凍融│☁✘☁。

2. 血漿•₪✘✘:EDTA或肝素作為抗凝劑採集標本✘✘,並將標本在採集後的30分鐘內於2-81000×g離心15分鐘✘✘,取上清即可檢測✘✘,或將上清置於-20℃或-80℃儲存✘✘,但應避免反覆凍融│☁✘☁。

3. 組織勻漿•₪✘✘:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織✘✘,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)✘✘,稱重後將組織剪碎│☁✘☁。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比✘✘,比如1g的組織樣品對應9mLPBS✘✘,具體體積可根據實驗需要適當調整✘✘,並做好記錄│☁✘☁。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中✘✘,於冰上充分研磨│☁✘☁。為了進一步裂解組織細胞✘✘,可以對勻漿液進行超聲破碎✘✘,或反覆凍融│☁✘☁。最後將勻漿液於5000×g離心5~10分鐘✘✘,取上清檢測│☁✘☁。

4. 細胞培養物上清•₪✘✘:1000×g離心20分鐘✘✘,取上清即可檢測✘✘,或將上清置於-20℃或-80℃儲存✘✘,但應避免反覆凍融│☁✘☁。

5. 其它生物標本•₪✘✘:1000×g離心20分鐘✘✘,取上清即可檢測│☁✘☁。

6. 樣品外觀•₪✘✘:樣品應清澈透明✘✘,懸浮物應離心去除│☁✘☁。

7. 樣品儲存•₪✘✘:樣品收集後若在1周內進行檢測的可保存於4℃✘✘,若不能及時檢測✘✘,請按一次使用量分裝✘✘,凍存於-20℃(1個月內檢測)✘✘,或-80℃(6個月內檢測)✘✘,避免反覆凍融✘✘,標本溶血會影響最後檢測結果✘✘,因此溶血標本不宜進行此項檢測│☁✘☁。

注意事項•₪✘✘:

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果│☁✘☁。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25│☁✘☁。使用後立即冷藏儲存試劑│☁✘☁。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果│☁✘☁。在加入底物前確保儘量吸乾孔內液體│☁✘☁。溫育過程中不要讓微孔乾燥掉│☁✘☁。

3. 消除板底殘留的液體和手指印✘✘,否則影響OD值│☁✘☁。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色✘✘,已經變藍的底物液不能使用│☁✘☁。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果│☁✘☁。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射│☁✘☁。

7. 平衡至室溫後再開啟密封袋以防水滴凝聚在冷板條上│☁✘☁。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體│☁✘☁。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性│☁✘☁。

9. 不能使用過期產品│☁✘☁。

10. 如果可能傳播疾病✘✘,所有的樣品都應管理好✘✘,按照規定的程式處理樣品和檢測裝置│☁✘☁。

操作步驟•₪✘✘:

實驗結果計算•₪✘✘:

繪製標準曲線•₪✘✘:以所測標準品的OD值為橫座標✘✘,標準品的濃度值為縱座標✘✘,在座標紙上或用相關軟體繪製標準曲線✘✘,並得到直線迴歸方程✘✘,將樣品的OD值代入方程✘✘,計算出樣品的濃度│☁✘☁。

  

(此圖僅供參考)

 

 

試劑盒效能•₪✘✘:

1. 檢測範圍•₪✘✘:1.0 U/L 80  U/L│☁✘☁。

2. 靈敏度•₪✘✘:檢測濃度小於1.0  U/L│☁✘☁。

3. 特異性•₪✘✘:不與其它可溶性結構類似物交叉反應│☁✘☁。

4. 重複性•₪✘✘:板內變異係數小於10% ✘✘,板間變異係數小於15% │☁✘☁。

技術小提示•₪✘✘:

1. 當混合或重溶蛋白溶液時✘✘,儘量避免起沫│☁✘☁。

2. 為了避免交叉感染✘✘,配置不同濃度標準品▩·•│、上樣▩·•│、加不同試劑都需要更換槍頭│☁✘☁。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽│☁✘☁。

3. 每次孵育時✘✘,請正確使用封板膠可保證結果的準確性│☁✘☁。

4. 混合後的顯色底物在上板前應為無色✘✘,請避光儲存;假如微孔板後✘✘,將由物色變成不同深度的藍色│☁✘☁。

5. 終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致;加入終止液後✘✘,孔內顏色由藍變黃;若孔內有綠色✘✘,則表明孔內液體未混勻;請充分混合│☁✘☁。

 

 

說明•₪✘✘:

1. 由於現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑑定與分析✘✘,本產品可能存在一定的質量技術風險│☁✘☁。

2. 最終的實驗結果與試劑的有效性▩·•│、實驗者的相關操作以及當時的實驗環境密切相關✘✘,請務必準備充足的標本備份│☁✘☁。

3. 不同批次的同一產品可能會有少許差別✘✘,如•₪✘✘:檢測限▩·•│、靈敏度以及顯色時間等✘✘,請依據試劑盒內說明書進行實驗操作✘✘,網站電子版說明書僅作參考│☁✘☁。

4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果✘✘,不能混用其他製造商的產品│☁✘☁。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果│☁✘☁。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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