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總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒說明書(ABTS 法)

釋出時間╃│•✘:2022-08-17   點選次數╃│•✘:312次


一₪✘、產品簡介╃│•✘:

ABTS 在適當的氧化劑作用下氧化成綠色的 ABTS+╃▩☁││,在抗氧化物存在時 ABTS+的產生會被抑制╃▩☁││,在 734nm 或 414nm 測定ABTS+的吸光度即可測定並計算出樣品的總抗氧化能力·◕☁。Trolox 是一種wei生素 E 的類似物╃▩☁││,具有和wei生素 E 相近的抗氧化能力╃▩☁││,用作其它抗氧化物總抗氧化能力的參考·◕☁。

二₪✘、試劑盒的組成和配製╃│•✘:

試劑名稱規格儲存要求備註

試劑一粉劑 mg×1 支4℃儲存臨用前甩幾下使粉劑落入底部╃▩☁││,再

加 1.47mL 蒸餾水╃▩☁││,充分溶解備用·◕☁。

試劑二粉劑 mg×1 支4℃儲存臨用前甩幾下使粉劑落入底部╃▩☁││,再

加 2.86mL 蒸餾水╃▩☁││,充分溶解備用·◕☁。

標準品液體×1 支4℃儲存

若重新做標曲╃▩☁││,則用到該試劑

工作液配置╃│•✘:臨用前將加水溶解後的試劑一和試劑二按照 1:1 比例混合╃▩☁││,避光反應 12h 後(二天內用完)╃▩☁││,再用 PBS 或無水乙醇稀釋 40 倍備用╃▩☁││,當待檢測樣品為水溶性樣品時╃▩☁││,用 PBS 稀釋;當待檢測樣品為非水溶性樣品時╃▩☁││,用 80%乙醇稀釋(最好現配現用)·◕☁。

三₪✘、所需的儀器和用品╃│•✘:

可見分光光度計₪✘、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)₪✘、低溫離心機₪✘、水浴鍋₪✘、可調式移液器₪✘、研缽₪✘、無水乙醇和蒸餾水·◕☁。

四₪✘、總抗氧化能力測定╃│•✘:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定╃▩☁││,熟悉實驗流程╃▩☁││,避免實驗樣本和試劑浪費▩·!

注╃│•✘:樣品中不能新增 DTT₪✘、巰基乙醇等影響氧化還原反應的物質╃▩☁││,也不宜新增 Tween₪✘、Triton 和 NP-40 等去垢劑·◕☁。

1₪✘、樣本製備╃│•✘:

① 組織樣本╃│•✘:

稱取約 0.1g 組織╃▩☁││,冰浴低溫勻漿╃▩☁││,加入 1mL 的冷 PBS(水溶性樣本)或 80%乙醇(非水溶性樣本)╃▩☁││,進行冰浴勻漿╃▩☁││,勻漿後轉入離心管中·◕☁。12000rpm╃▩☁││,4℃離心 10min╃▩☁││,取上清╃▩☁││,置冰上待測·◕☁。

【注】╃│•✘:若增加樣本量╃▩☁││,可按照組織質量(g)╃│•✘:提取液體積(mL)為 1╃│•✘:5~10 的比例進行提取

② 液體樣本╃│•✘:直接檢測;若渾濁╃▩☁││,離心後取上清檢測·◕☁。

2₪✘、上機檢測╃│•✘:

可見分光光度計預熱 30min 以上╃▩☁││,調節波長至 414nm╃▩☁││,蒸餾水調零·◕☁。

不同樣本清除能力不一╃▩☁││,可先選取 2 個樣本做檢測╃▩☁││,若 A 測定-A 對照接近零╃▩☁││,需對樣本進行稀釋(稀釋液與組織提取液一致╃▩☁││,即水溶性樣本用 PBS 或蒸餾水稀釋╃▩☁││,非水溶性樣本用 80%乙醇稀釋)後再檢測╃▩☁││,稀釋倍數 D 代入公式計算·◕☁。

在 EP 管中依次加入╃│•✘:

試劑名稱(μL)測定管對照管空白管(做一次)

樣本4040

PBS 或 80%乙醇76040

工作液760760





【注】若一次性樣本較多╃▩☁││,可用排槍或者分批檢測╃▩☁││,以使測定管的反應時間(避光靜置 6min) 保持一致·◕☁。

五₪✘、結果計算╃│•✘:

1₪✘、標準曲線╃│•✘:y = 3.3471x-0.0291╃▩☁││,x 是標準品 Trolox 摩爾濃度(μmol/mL)╃▩☁││,y 是△A·◕☁。

2₪✘、按樣本質量計算╃│•✘:

總抗氧化能力(μmol Trolox/g 鮮重)=[(𝗈A+0.0291)÷3.3471×V1]÷(V1÷V×W) ×D

=0.3×(𝗈A+0.0291)÷W×D

3₪✘、液體樣本╃│•✘:

總抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=[(𝗈A+0.0291)÷3.3471×V1]÷V1×D

=0.3×(𝗈A+0.0291)×D






V----加入提取液體積╃▩☁││,1 mL;V1反應中樣品體積╃▩☁││,40μL=0.04 mL;

W----樣品質量╃▩☁││,g;Trolox 分子量250.29



附╃│•✘:標準曲線製作過程╃│•✘:

1標準品母液(2mM)·◕☁。

2把母液用相應的提取液稀釋成以下濃度梯度的標準品╃│•✘:0╃▩☁││,0.08╃▩☁││,0.16╃▩☁││,0.24╃▩☁││,0.32╃▩☁││,

0.4 mM·◕☁。也可根據實際樣本來調整標準品濃度·◕☁。

3按照測定管加樣體系操作╃▩☁││,依據結果即可製作標準曲線·◕☁。

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