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人β2糖蛋白1第一結構域抗體(hrβ2GPⅠDⅠ)測定試劑盒

釋出時間✘╃:2022-08-08   點選次數✘╃:268次


 

指標名稱✘╃:β2糖蛋白1第一結構域抗體(hrβ2GPⅠDⅠ)酶聯免疫試劑盒

規格✘╃:96T/48T

保質期✘╃:6個月(具體請見試劑盒外包裝標籤)

用途✘╃:試劑盒用於體外定量檢測血清↟·◕◕、血漿或其他相關生物液體中β2糖蛋白1第一結構域抗體(hrβ2GPⅠDⅠ)濃度₪✘。

●靈敏度✘╃:1 ng/mL 

●特異性✘╃:檢測樣本中的β2糖蛋白1第一結構域抗體(hrβ2GPⅠDⅠ)✘₪◕··,與其類似物無明顯交叉反應₪✘。

●重複性✘╃:板內✘₪◕··,板間變異係數均 < 15%₪✘。

 


 

 

 

使用前請仔細閱讀產品說明書₪✘。如果有任何疑問✘₪◕··,請及時聯絡我司相關人員₪✘。聯絡時請提供產品批號✘₪◕··,以便我們更高效的為您服務₪✘。

 

 

 

 

檢測原理✘╃:

試劑盒採用間接法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)₪✘。往預先包被人hrβ2GPⅠDⅠ捕獲抗原的包被微孔中✘₪◕··,依次加入標本↟·◕◕、標準品↟·◕◕、HRP標記的檢測抗體✘₪◕··,經過溫育並*洗滌₪✘。用底物TMB顯色✘₪◕··,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色✘₪◕··,並在酸的作用下轉化成最終的黃色₪✘。顏色的深淺和樣品中的人hrβ2GPⅠDⅠ呈正相關₪✘。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)✘₪◕··,計算樣品濃度₪✘。  

組份

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8

12孔×4

標準品

6

6

稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

25mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

試劑盒組成及儲存 

未拆封的試劑盒可在2-8℃儲存6個月拆封後建議在1個月內使用₪✘。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

說明✘╃:

1↟·◕◕、所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的汙染₪✘。試劑體積以實際發貨為準₪✘。相關試劑在分裝時會比標籤上標明的體積稍多一些✘₪◕··,請在使用時量取✘₪◕··,而非直接倒出₪✘。

試驗所需自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭✘╃:0.5-10uL↟·◕◕、2-20uL↟·◕◕、20-200uL↟·◕◕、200-1000uL

3. 37恆溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

樣品收集方法: 

樣品種類繁多✘₪◕··,建議使用參考論文中的樣本處理方法✘₪◕··,以下羅列常規幾種樣品製備方法✘₪◕··,僅供參考₪✘。

1. 血清✘╃:全血樣品於室溫放置2小時或4℃過夜後於2000prm轉速離心20分鐘✘₪◕··,取上清即可檢測✘₪◕··,收集血液的試管應為一次性的無內毒素試管₪✘。

2. 血漿✘╃:抗凝劑推薦使用EDTA鈉鹽✘₪◕··,樣品採集30分鐘內於2000prm轉速離心15分鐘✘₪◕··,取上清即可檢測₪✘。避免使用溶血✘₪◕··,高血脂樣品₪✘。

3. 組織勻漿✘╃:用預冷的PBS(0.01M✘₪◕··,pH=7.4)沖洗組織✘₪◕··,去除殘留血液✘₪◕··,稱重後將組織剪碎₪✘。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比✘₪◕··,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS✘₪◕··,具體體積可根據實驗需要適當調整✘₪◕··,並做好記錄₪✘。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中✘₪◕··,在冰上充分研磨₪✘。為了進一步裂解組織細胞✘₪◕··,可以對勻漿液進行超聲破碎或反覆凍融₪✘。最後將勻漿液5000prm轉速離心5-10分鐘✘₪◕··,取上清檢測₪✘。

4. 細胞提取液✘╃:貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗✘₪◕··,然後用胰蛋白酶消化✘₪◕··,2000prm轉速離心5分鐘後收集細胞;懸浮細胞可直接離心收集₪✘。收集的細胞用冷的PBS 洗滌3次₪✘。每 1×106個細胞中加入150-200μL PBS重懸✘₪◕··,反復凍融使細胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)₪✘。將提取液於2000prm轉速離心10分鐘✘₪◕··,取上清檢測₪✘。

5. 細胞培養上清或其他生物體液✘╃:2000prm轉速離心20分鐘✘₪◕··,除去雜質及細胞碎片₪✘。取上清檢測₪✘。

樣品注意事項:

    1. 樣品收集後若在1周內進行檢測的可保存於4℃✘₪◕··,若不能及時檢測✘₪◕··,請按一次使用量分裝✘₪◕··,凍存於-20℃以下✘₪◕··,避免反覆凍融₪✘。標本溶血會影響最後檢測結果✘₪◕··,因此溶血標本不宜進行此項檢測₪✘。

2. 試劑盒檢測範圍不等同於樣本的濃度範圍✘₪◕··,如果您的樣品中檢測物濃度高於標準品最高值✘₪◕··,請根據實際情況✘₪◕··,做適當倍數稀釋(建議查閱文獻後先做預實驗✘₪◕··,以確定稀釋倍數)₪✘。

3. 若使用化學裂解液製備組織勻漿或細胞提取液✘₪◕··,由於引入某些化學物質會導致ELISA測值出現偏差₪✘。 

4. 某些重組蛋白可能與試劑盒中捕獲或檢測抗體不匹配而出現不能檢測的情況₪✘。

檢測前準備工作✘╃:

1. 試劑盒及樣本從冰箱中取出後應置室溫(25-28ºC)平衡120分鐘注意✘╃:試劑盒和樣本的平衡✘₪◕··,非常重要✘₪◕··,一定要平衡到足夠時間;每次檢測後剩餘試劑請及時置於4ºC儲存₪✘。

2. 配製適當量的洗滌液✘╃:將洗滌液(20X)用雙蒸水或去離子水稀釋至1X✘₪◕··,例如10ml洗滌液(20X)加190ml水混勻後即為1X的洗滌液₪✘。

3.檢測範圍✘╃:0.25-120 ng/ml

4. 標準品已經稀釋✘₪◕··,濃度依次為✘╃:120↟·◕◕、60↟·◕◕、30↟·◕◕、15↟·◕◕、7.5↟·◕◕、3.75 ng/mL₪✘。 

操作步驟✘╃:

1. 計算並確定一次實驗所需的預包被板條數✘₪◕··,取出所需板條放置在96孔框架內✘₪◕··,剩餘微孔板放回鋁箔袋密封✘₪◕··,保存於4ºC₪✘。

2.  試劑盒和樣本在室溫下(25-28ºC)平衡120min✘₪◕··,充分平衡到室溫(注意✘╃:試劑盒和樣本的平衡✘₪◕··,非常重要✘₪◕··,一定要平衡到足夠時間)₪✘。

3.  設定標準品孔↟·◕◕、樣本孔和空白孔₪✘。

4.  標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

5.  樣本孔待測樣本50μL;

6.  空白孔加入樣本稀釋液50μL

7.  所有孔中✘₪◕··,每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL✘₪◕··,用封板膜封住反應孔✘₪◕··,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min₪✘。

8.  棄去液體✘₪◕··,吸水紙上拍幹✘₪◕··,每孔加滿洗滌液350μL✘₪◕··,靜置20s✘₪◕··,甩去洗滌液✘₪◕··,吸水紙上拍幹✘₪◕··,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)₪✘。

9.  每孔加入底物A↟·◕◕、B各50μL✘₪◕··,37℃避光孵育15min₪✘。

10. 每孔加入終止液50μL✘₪◕··,15min內✘₪◕··,在450nm波長處測定各孔的OD值₪✘。

結果分析✘╃:

1. 復孔的值通常在15%的差異範圍內結果才有效✘₪◕··,復孔平均值可作為測量值₪✘。

2. 每個標準品或樣品的吸光度值應減去本底校正孔的吸光度值(如果沒有做校正孔✘₪◕··,則不需要減去)₪✘。

3. 繪製標準曲線₪✘。以標準品濃度為橫座標✘₪◕··,A450值為縱座標✘₪◕··,以平滑線連線各標準品的座標點₪✘。透過樣品的吸光度值和標準曲線(直線擬合)計算出樣品的相應濃度(工作人員可提供計算軟體)₪✘。

4. 若樣品OD值高於標準曲線上限✘₪◕··,應適當稀釋後重新測定✘₪◕··,計算濃度時需注意乘以樣品的稀釋倍數₪✘。

 

 

(示意圖✘₪◕··,僅供參考)

注意事項✘╃: 

1. 加樣時✘₪◕··,請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭✘₪◕··,一方面避免交叉汙染✘₪◕··,另一方面也避免吸取體積的誤差₪✘。 

2. 不混用不同批號的試劑盒組份✘₪◕··,每批試劑盒都經過獨立測試₪✘。

3. 試劑盒很多操作在室溫進行✘₪◕··,要求嚴格控制室溫在22-28ºC₪✘。溫度低於22ºC會導致最終檢測到的吸光度顯著下降₪✘。

4. 洗滌過程非常重要✘₪◕··,洗滌不充分會使精確度下降並導致結果誤差較大₪✘。

5. 本產品僅限於專業人員的科學研究用✘₪◕··,不得用於臨床診斷或治療✘₪◕··,不得用於食品或藥品✘₪◕··,不得存放於普通住宅內₪✘。為了您的安全和健康✘₪◕··,請穿實驗服並戴一次性手套操作₪✘。


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