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人ELISA試劑盒實驗步驟

釋出時間◕•▩│:2022-07-22   點選次數◕•▩│:208次

人ELISA試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)₪☁◕•。該法適於測定細胞培養上清▩↟↟•、血清▩↟↟•、血漿及組織液中的樣本·◕,干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平₪☁◕•。在這種測定方法中有3種必要的試劑◕•▩│:
①固相的抗原或抗體₪☁◕•。
②酶標記的抗原或抗體₪☁◕•。
③酶作用的底物₪☁◕•。

 

人ELISA試劑盒操作步驟
使用前·◕,將所有試劑充分混勻₪☁◕•。不要使液體產生大量的泡沫·◕,以免加樣時加入大量的氣泡·◕,產生加樣上的誤差₪☁◕•。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數₪☁◕•。每個標準品和空白孔建議做復孔₪☁◕•。每個樣品根據自己的數量來定·◕,能使用復孔的儘量做復孔₪☁◕•。標本用標本稀釋液1◕•▩│:1稀釋後加入50ul於反應孔內₪☁◕•。
加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔▩↟↟•、加入待測樣品50ul於反應孔內₪☁◕•。立即加入50ul的生物素標記的抗體₪☁◕•。蓋上膜板·◕,輕輕振盪混勻·◕,37℃溫育1小時₪☁◕•。
甩去孔內液體·◕,每孔加滿洗滌液·◕,振盪30秒·◕,甩去洗滌液·◕,用吸水紙拍幹₪☁◕•。重複此操作3次₪☁◕•。如果用洗板機洗滌·◕,洗滌次數增加一次₪☁◕•。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP·◕,輕輕振盪混勻·◕,37℃溫育30分鐘₪☁◕•。
甩去孔內液體·◕,每孔加滿洗滌液·◕,振盪30秒·◕,甩去洗滌液·◕,用吸水紙拍幹₪☁◕•。重複此操作3次₪☁◕•。如果用洗板機洗滌·◕,洗滌次數增加一次₪☁◕•。
每孔加入底物A▩↟↟•、B各50ul·◕,輕輕振盪混勻·◕,37℃溫育10分鐘₪☁◕•。避免光照₪☁◕•。
取出酶標板·◕,迅速加入50ul終止液·◕,加入終止液後應立即測定結果₪☁◕•。
在450nm波長處測定各孔的OD值₪☁◕•。

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