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PCR試劑盒注意事項

釋出時間☁•▩·│:2022-06-27   點選次數☁•▩·│:261次



1. 樣品處理(樣本處理區)

1.1 樣本前處理

取動物組織及其製品·•✘╃☁、食品或飼料1g•│☁,手術剪剪碎混勻後0.5g於研磨器中研磨•│☁,1.5mL理鹽水後 繼續研•│☁,待勻漿後轉至 1.5mL滅菌離心管中•│☁,8000rpm2min•│☁,取上清100μL1.5mL滅菌離心管中╃·✘·•。

1.2 核酸提取

推薦份有限公劑(磁珠酸提取•│☁,請按照試劑說明書進行操作╃·✘·•。

2. 試劑配製(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數•│☁,設所需要的 PCR反應管管數為 N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照樣品每滿

10 份•│☁,多配1 )•│☁,每測試反應體系配製如下表☁•▩·│:

試劑

Chicken反應液

酶液

用量(樣本數為 N

20μL

1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR反應管中•│☁,21uL/管╃·✘·•。

3. 加樣(樣本處理區)

將步1 提取的核酸·•✘╃☁、陽性質控品·•✘╃☁、陰性質控品各4μL•│☁,分別加入相應的反應管中•│☁,蓋好管蓋•│☁,混勻•│☁,短暫離心╃·✘·•。

4. PCR擴增(核酸擴增區)

4.1 將待檢測反應管置於熒光定量 PCR儀反應槽內;

4.2 設定好通道·•✘╃☁、樣品資訊•│☁,反應體系設定25μL

熒光☁•▩·│: Reporter DyeFAM•│☁, 道(Quencher DyeNONE•│☁,ABI選擇ROX參比熒光•│☁,選擇 None即可╃·✘·•。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行;

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化•│☁,*混勻並短暫離心;

3.反應液應避光儲存;

4.反應中儘量避免氣泡存在•│☁,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭·•✘╃☁、一次性手套和各區專用工作服;

6.樣本處理·•✘╃☁、試劑配製·•✘╃☁、加樣需在不同區進行•│☁,以免交叉汙染;

7.實驗完畢後10%次氯酸75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8.試劑盒裡所有物品應視為汙染物對待•│☁,並按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理╃·✘·•。


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